TP: Cultivo de Bacterias. 5tos Biológicos.

Les dejo a continuación el texto del trabajo práctico que haremos luego de semana santa. Cariños. Silvia. Alumno:………………………………………………… Curso:……….. Fecha:…………….. TRABAJO PRÁCTICO: CULTIVO DE BACTERIAS. Objetivo: cultivar y observar bacterias en microscopio. Materiales para el cultivo: Lavarse las manos con jabón desinfectante antes de comenzar a trabjar. 3 cajas de Petri desinfectadas (colocarlas durante 48 hs en lavandina al 50%) 4 sobres de gelatina sin sabor. Un vaso de agua. 1cucharada al ras de azúcar. 3 isopos estériles 1 cuchara 1 olla Violeta de genciana Lugol Alcohol-acetona (50%-50%) Jabón desinfectante Fucsina básica fenicada Agua destilada esteril o solución fisi¿ológica estéril. Reloj. Papel absorbente (para limpiar) Se recomienda el uso de guantes descartables Procedimiento para el cultivo: Lavarse las manos con jabón desinfectante. Colocar el vaso de agua en la olla y llevar al fuego, luego espolvorear el azúcar y la gelatina. Revolver hasta que hierva. Retirar las cajas de Petri sin abrirlas y enumerar las cajas de Petri con marcador indeleble. Verter la mezcla en partes iguales en las cajas de Petri. Taparlas inmediatamente. Dejar que la gelatina se endurezca. Pasar uno de los isopos por entre los dedos de los pies y pasar el mismo sobre la gelatina de la caja de Petri 1. El segundo isopo pasarlo por el interior de la boca y frotarlo sobre la gelatina de la caja de Petri 2. El tercer isopo pasarlo por la suela de los zapatos y/o zapatilla y frotarlo por la gelatina de la caja de Petri 3. Colocar las tres cajas de Petri en la estufa a una temperatura de 24 °C durante tres o cuatro días. Observar y tomar nota de lo visto. Pueden fotografiar, sin abrir las cajas de Petri. Anota lo observado. Acuerda con tu equipo de trabajo alguna variante del trabajo y plantea una hipóteis. Anótalo. Diseña un trabajo con dicha variante. Ponerlo en práctica. Vuelve a dejar los cultivos en la estufa para usar mas adelante. Cultivo de Bacillus mesentéricus. Hervir bastoncitos de papas hasta antes de que se hagan puré con una pizca muy pequeña de sal. Dejar enfriar y trasvasar a un frasco lavado con lavandina y bien enjuagado. Tapar la boca del frasco con una media de nylon. Dejar 4 o 5 días. Pasar el ansa de platino por la llama del mechero. Extraer una porción con un ansa de platino y llevar al porta objeto perfectamente limpio. Realizar la técnica de Gram. Técnica de Gram a) Se coloca una pequeña cantidad del caldo cultivado (cultivo) y de cada caja de Petri de la estufa cada una en un portaobjetos y deperfectamente limpio. Marcar con marcador en un extremo para diferenciarlas. Esa cantidad debe ser lo menos posible y debe estar extendida en forma uniforme sobre el portaobjeto. Secar y fijar con calor. b) Se le agregan gotas de Violeta de genciana que se dejan por un minuto. c) Se lava el violeta de genciana y se cubre con Lugol que actúa como "mordiente", y se deja por un minuto. d) Se decolora con alcohol-acetona (50% y 50%). Hasta aquí las bacterias "Gram positivas" absorberán el color violeta y resistirán la decoloración. Las "Gram negativas", como no se colorean, necesitan una coloración de contraste para poder ser observadas: e) Se agrega al extendido unas gotas de fucsina básica fenicada. Dejar un minuto. f) Lavar con agua. g) Se rotula el preparado, se lo seca y queda listo para observar. Observación en el microscopio óptico: 1) Coloca el portaobjeto sobre la platina del microscopio. 2) Ubica el objetivo de menor aumento. Enfoca hasta ver una imagen nítida. 3) Recorre el preparado para encontrar una zona lo más delgada y nítida posible. 4) Reconoce las partes celulares que logres observar. 5) Esquematiza lo mas fielmente posible (utiliza colores). Coloca las referencias e indica, teniendo en cuenta la forma de las bacterias, a qué grupo pertenecen. Para descartar el material previamente se deberán sumergir todas las cajas de Petri en una solución al 50% de lavandina por tres días, luego retirar con guantes, escurrir y desechar envueltas en bolsas plásticas.